Tutor 1

Hernández Rodríguez, Patricia

Tutor 2

Gómez Ramírez, María Vanessa

Resumen

Pseudomonas aeruginosa es una bacteria, aerobia, Gram negativa, móvil, que es patógena para humanos y para algunos animales. Está catalogada por la OMS como prioridad critica por su alta resistencia a antibióticos y por su variedad de factores de virulencia que facilitan la infección de huéspedes principalmente inmunosuprimidos. Los factores de virulencia de P. aeruginosa están controlados por su Quorum Sensing (QS), el cual es un sistema de señalización intracelular que controla la expresión de genes responsables de la densidad poblacional usando moléculas autoinductoras. El QS se regula mediante subsistemas específicos como lasL/lasR, rhlR/rhlL, PQS e IQS los cuales tienen asociados a cada uno de ellos diferentes mecanismos que les permite expresar los factores de virulencia que tengan asociados, entre otros, se encuentra la resistencia antimicrobiana que se deriva de la formación de biopelícula. Lo anterior ha llevado a buscar tratamientos alternativos eficaces frente a esta bacteria, por tal razón, se propone el uso de plantas o sus derivados; así como, las mezclas de estos con antibióticos debido a su potencial inhibitorio frente a los genes reguladores del QS. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue establecer el efecto de curcumina, reserpina y sus mezclas con dos antibióticos comerciales sobre el QS de P. aeruginosa. Como marco metodológico se utilizó la cepa ATCC (BAA-047) la cual es resistente a antibióticos, se determinó la MIC de los cuatro compuestos analizados y para evidenciar la expresión del gen mvfR se sometió la bacteria a ¼ de la MIC hasta que el control positivo alcanzó una absorbancia entre 0.6-0.8 a 600nm. Posteriormente se realizó la extracción, purificación y cuantificación del RNA de las bacterias sometidas a los compuestos individuales y las mezclas seleccionadas. Se realizó la RT-PCR de los RNAs amplificando el gen mvfR y se evaluaron de forma semicuantitativa los productos amplificados para cada tratamiento por medio de densitometría, como house-keeping se usó el gen rpoD. Posteriormente se evaluó el efecto en el crecimiento de las mejores mezclas realizando la curva de crecimiento por 24 horas y se evaluaron los factores de virulencia ramnolípidos y piocianinas sometidos a las mezclas escogidas. Como resultados se obtuvo que las concentraciones mínimas inhibitorias obtenidas fueron de 256ng/µL y 5ng/µL para azitromicina y gentamicina respectivamente. Para los compuestos naturales no fue posible obtener una MIC por lo que se utilizó una concentración estándar de 200ng/µL para la extracción de RNA. La expresión del gen mvfR varió significativamente siendo menor al utilizar gentamicina, curcumina y reserpina, en 24%, 26% y 25% respectivamente con respecto a las bacterias sin tratamiento, lo cual indica que estos compuestos tienen mejor inhibición del QS que la azitromicina la cual obtuvo una expresión del 42%. En cuanto a las mezclas se determinó que gentamicina-curcumina y gentamicina-reserpina tuvieron un efecto sinérgico en la inhibición del gen mvfR mostrando porcentajes de expresión de 15% y 13% respectivamente. Así mismo los porcentajes de producción de piocianinas y ramnolípidos presentaron los valores más bajos al usar la mezcla de reserpina-gentamicina con valores de 24.5% y 68% respectivamente. Con estos resultados se puede concluir que existe una sinergia entre compuestos naturales y antibióticos, específicamente entre curcumina-gentamicina y reserpina-gentamicina, lo que da lugar a desarrollar diferentes tipos de tratamientos alternativos para complementar, remplazar o potenciar métodos convencionales que se usan actualmente contra P. aeruginosa.

Programa académico

Biología

Palabras clave

Compuestos naturales, Expresión génica, Factores de virulencia, Pseudomonas aeruginosa, Quorum sensing

Tipo de documento

Trabajo de grado - Pregrado

Licencia Creative Commons

Creative Commons Attribution-Noncommercial-No Derivative Works 4.0 License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-Noncommercial-No Derivative Works 4.0 License.

Fecha de elaboración

2020

Programa académico

Biología

Facultad

Departamento de Ciencias Básicas

Publisher

Universidad de La Salle. Departamento de Ciencias Básicas. Biología

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