Tutor 1

Díaz Rojas, César Augusto

Resumen

En mamíferos, los espermatozoides recién eyaculados son móviles y viables, no obstante son incapaces de fecundar al oocito. Para lograr esta función es necesario que ocurra el proceso de capacitación que se produce al interactuar los espermatozoides con las secreciones presentes en el tracto reproductivo femenino. Ello conlleva a cambios bioquímicos en la membrana celular, como modificación del pH intracelular, incremento de la permeabilidad para iones como el Ca2+, aumento en la fluidez de la membrana plasmática y su metabolismo, y a la modificación de los patrones de fosforilación de proteínas y composición lipídica. Teniendo en cuenta este proceso fisiológico el objetivo de este trabajo fue evaluar tres protocolos que inducen capacitación espermática In Vitro en el espermatozoide bovino. Los protocolos son: 1) Medio TALP; descrito por Parrish, 1988; 2) Medio BO, descrito por Brackett y Oliphant, 1975; y 3) Medio BWW; publicado por Visesato M, 2007, trabajando con heparina como inductor de la capacitación espermática bovina. Se determinó cual de estos se desempeña mejor evaluando penetración oocitaria. Es por eso que además de trabajar con espermatozoides bovinos, se trabajó In Vitro oocitos madurados con suero fetal bovino para obtener una deseada penetración oocitaria. Se utilizó semen congelado de un toro propiedad de la universidad de La Salle (F1 Holstein x Normando) al cual se le realizó capacitación y selección espermática por el método swim-up para los tres protocolos anteriormente mencionados. Para determinar si la célula espermática ha sido capacitada, utilizamos eosina, como colorante la cual nos ayudo a la identificación de los espermatozoides que presentaron reacción acrosómica. Los ovocitos provenían de ovarios de un matadero local de la ciudad de Bogotá. Estos fueron madurados por cultivo en un medio TCM-199 suplementado con SFB durante 24 horas. Después de madurados, fueron fertilizados a una concentración de 1 x 106 espermatozoides/ml. Todos los cigotos fueron cultivados en un medio que contenía SSFA+SFB por siete días para cuando se esperaba estarían en estado de mórula o blastocito. A nivel de laboratorio se observó cual de los tres protocolos de capacitación espermática se comportó mejor de acuerdo al porcentaje de penetración espermática. Los resultados mostraron una mejor tasa de fertilización utilizando el protocolo TALP + Heparina, 29,62%, presentando mayor numero de cigotos que utilizando el protocolo B.O. y B.W.W, 28,70 y 19,44% respectivamente. Pero los resultados no fueron significativos, ósea no hubo diferencias notorias entre los tres medios de capacitación con respecto al porcentaje de fertilización In Vitro, (p>0,05). Los porcentajes de espermatozoides vivos capacitados y porcentaje de reacción acrosómica fueron significativamente diferentes para los tres medios, presentando los mejores resultados cuando se trabajo con medio TALP + Heparina.

Resumen en lengua extranjera 1

In mammals, sperm newly ejaculate are mobile and viable, however are unable to fertilise the oocyte. To achieve this function is necessary to happen the training process that occurs when sperm interact with secretions in the female reproductive tract. This leads to biochemical changes in the cell membrane, as amended intracellular pH, increased permeability for ions such as Ca2 +, increasing the fluidity of the cell membrane and their metabolism, and changing patterns of protein phosphorylatión and composition lipid. Taking into account this physiological process the aim of this study was to evaluate three protocols that induce In Vitro sperm training in cattle sperm. The protocols are: 1) Medium Talp; described by Parrish, 1988; 2) Medium BO, described by Brackett and Oliphant, 1975, and 3) Medium BWW; published by Visesato F, 2007, working with heparin as inducer of training sperm bovine. It was determined that these plays are better assess oocyte penetration. That's why in addition to working with cattle sperm, they worked In Vitro matured oocytes with fetal bovine serum to obtain a desired oocyte penetration. We used frozen semen of a bull owned by the De La Salle University (F1 Holstein x Norman) to which he conducted training and selection by the sperm swim-up method for the three protocols above. To determine whether the sperm cell has been trained, we use eosin, as a colour which helped us to identify sperm that had acrosome reaction. Oocytes ovaries came from a local slaughterhouse in the city of Bogotá. These were matured in cultivation by half TCM-199 supplemented with SFB for 24 hours. After matured, were fertilized in a concentration of 1 x 106 sperm / ml. All zygotes were cultured in a medium containing SSFA + SFB for seven days when it was expected to be in a state of morula or blastocyst. At the laboratory was found which of the three protocols training sperm are better behaved according to the percentage of sperm penetration. The results showed a better rate of fertilization using the protocol Talp + Heparin, 29.62%, introducing greater number of zygotes that using the protocol BO and B.W.W, 28.70 and 19.44% respectively. But the results were not significant, bone there were no differences among the three notorious media training with regard to the percentage of In Vitro fertilization (p> 0.05). The percentages of live sperm cells trained and percentage reaction acrosómica were significantly different for all three media, presenting the best results when working with half Talp + Heparin.

Palabras clave

Reproducción de ganado bovino, Inseminación artificial, Biotecnología reproductiva

Tipo de documento

Trabajo de grado - Pregrado

Licencia Creative Commons

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Fecha de elaboración

2008

Programa académico

Medicina Veterinaria

Facultad

Facultad de Ciencias Agropecuarias

Publisher

Universidad de La Salle. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Medicina Veterinaria

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