Tutor 1

Brandão, Paulo Eduardo

Resumen

La porcicultura es una parte importante del sector pecuario colombiano, contribuyendo para la economía nacional y ofreciendo una importante fuente de proteínas para consumo humano. Así, el estudio de enfermedades porcinas, como la circovirosis, una enfermedad de interés emergente mundialmente, es fundamental para la cuantificación del impacto de la misma sobre la porcicultura nacional. Además, la complejidad de los síntomas, el escaso conocimiento acerca de la distribución geográfica en Colombia y la falta de un profundo conocimiento de la patogenia del circovirus tipo 2 (PCV-2) hacen de la circovirosis un tema de interés prioritario a nivel de investigación. En este sentido, se justificó la validación de una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para el diagnóstico del PCV-2 en sueros de porcinos por la posibilidad de la detección de animales infectados que estén vivos y sobre los cuales se pueda tomar decisiones, como, por ejemplo, el descarte o separación del rebaño, sin la necesidad de esperar hasta el sacrificio para la detección. Además, la toma de sueros es poco invasiva y se hace en forma rutinaria en la cría de porcinos, siguiendo el protocolo propuesto en el presente proyecto, sin la generación de trastornos a los criadores. La técnica de PCR fue de elección para el diagnóstico de PCV-2 por ser sensible, específica y no necesitar de reactivos inmunológicos, difíciles de obtener para este tipo de virus. Por lo tanto, los objetivos de este proyecto eran validar una técnica de PCR para detección de PCV-2 en sueros de porcinos, utilizando sueros negativos para PCV2 artificialmente contaminados con muestras de ADN de PCV-2 y la aplicación de la técnica validada en muestras de sueros de porcinos para detección del PCV-2. Para la realización de este proyecto, la metodología se dividió en dos grandes fases. En la primera, o fase de validación, se tomaron macerados de tejidos de porcinos (hígado, bazo y nódulos linfáticos) previamente evaluados como positivos por PCR y disponibles en el laboratorio; acto seguido estas muestras fueron diluidas en muestras negativas, previamente evaluadas por PCR como negativas. Estas diluciones fueron valoradas por PCR y se observó la especificidad y sensibilidad analíticas. Hecho esto, la fase siguiente, o aplicación, estuvo constituida por el muestreo de sueros de porcinos, disponibles en el Departamento de Medicina Veterinaria Preventiva y Salud Animal (VPS), de la Faculdad de Medicina Veterinaria y Zootecnia (FMVZ), de la Universidad de São Paulo (USP). A estas muestras se aplicó la PCR previamente validada. Se esperaban como resultados, la positividad de las muestras artificialmente contaminadas y en cuanto a las muestras de campo se espera que la PCR permita la detección de PCV-2 o la comprobación del su negatividad. Se encontró, después de la aplicación de 2 diferentes PCRs, un 100% de animales negativos a PCV-2; además, la PCR dirigida a una región entre las ORF 1 y 2 del virus se presentó como más sensible al ser comparada a otra PCR dirigida al gen de la proteína de cápside. Se concluyó que la PCR es una técnica válida para la detección de PCV-2 en sueros porcinos y que la población muestreada era libre del virus.

Resumen en lengua extranjera 1

Swine production is an important part of the Colombian livestock sector, contributing to the national economy and offering an important protein source for human consumption. Thus, the study of swine diseases, like circovirosis, a disease of emergent worldwide interest, is fundamental for quantifying the impact of the same on the national swine production. In addition, the complexity of the symptoms, the little knowledge about the geographic distribution in Colombia and the lack of a deep knowledge on the pathogenesis of Porcine Circovirus type 2 (PCV-2) make the circovirosis a subject of high-priority interest at level of investigation. In this sense, the validation of a PCR (Polymerase Chain Reaction) for the diagnosis of the PCV-2 in pigs serum is justified by the possibility of detection in live animals on which decisions can be made, like, for example, the discarding or separation from the flock, without waiting until the slaughter for detection. In addition, the collection of sera is little invasive and, following the protocol proposed in this project, is routinely made in young pigs, without upheavals to breeders. The PCR technique is of choice for the PCV-2 diagnosis due to its sensitivity and specificity and because it doesn’t need immunological reagents, so difficult to obtain for this type of virus. Therefore, the objectives of this project were to validate a PCR technique for detection of porcine circovirus type 2 (PCV-2) in swine sera, using negative for PCV-2 sera artificially contaminated with PCV-2 DNA samples, and the application of the technique validated in swine sera samples for detection of the PCV-2. For the carrying out of this project, the methodology was divided in two great phases. In the first, or validation phase, macerated pigs tissues (liver, spleen and lymphatic nodes) previously evaluated as positive by PCR and available in the laboratory were taken; immediately afterwards these samples were diluted in negative samples, previously evaluated by PCR as negative. These dilutions were valued by PCR and they were observed for analytic specificity and sensitivity. Once this was done, the following phase, or application phase, was constituted by the taking of pig’s serum samples, of the Departamento de Medicina Veterinaria Preventiva e Saúde Animal (VPS), da Faculdade de Medicina Veterinária y Zootecnia (FMVZ), de la Universidade de São Paulo (USP). On these samples, the previously validated PCRs were applied. The expected results were: the positivity of the samples artificially contaminated and, regarding the field samples, the expectations were that the PCR allows the detection of PCV-2 or the verification of the their negativity. After the application of 2 PCRs, 100% of the samples were found negative to PCV2; furthermore, the PCR targeted to a region between ORFS 1 and 2 of the virus showed a higher sensitivity when compared to another PCR targeted to the capsid protein gene. We concluded that the PCR is a valid technique for the detection of PCV-2 in swine sera and that the sampled population was free of the virus.

Palabras clave

Porcicultura, Sector pecuario, Enfermedades porcinas, Circovirosis

Tipo de documento

Trabajo de grado - Pregrado

Licencia Creative Commons

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Fecha de elaboración

1-17-2007

Programa académico

Medicina Veterinaria

Facultad

Facultad de Ciencias Agropecuarias

Publisher

Universidad de La Salle. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Medicina Veterinaria

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