Tutor 1
Velasco Santamaría, Yohana María
Resumen
El objetivo del presente estudio fue determinar las actividades enzimáticas superóxido dismutasa (SOD) y catalasa (CAT), indicadoras de estrés oxidativo en embriones de yamú (Brycon amazonicus) ante la exposición a dos diferentes crioprotectores metanol y dimetil sulfóxido al 15% y conservados a -14ºC durante una hora. Para tal fin, embriones viables en estado de segmentación faringulación (8 hpf) fueron expuestos a dos crioprotectores, metanol (MET) y dimetil sulfóxido (DMSO) al 15% los cuales, fueron depositados en tubos tipo Falcon plásticos estériles de 13 mL en relación 1: 1 con las soluciones crioprotectoras y conservados a -14 ° C durante 1 hora. En cada experimento se incluyó un grupo control (embriones no sometidos a crioprotector) y muestreados a las mismas horas que los tratamientos. Adicional a los tratamientos se tomaron muestras de oocitos y huevos recién fertilizados. Las muestras de embriones, se homogeneizaron en una solución buffer refrigerante (100 Mm Tris – HCl, 0.1 Mm EDTA y 0.1% Triton X-100) (v / v), pH 7.8, en una proporción de 1: 4 (peso / volumen ), el homogeneizado fue centrifugado y el sobrenadante fue colectado y conservado a -70ºC hasta su posterior análisis. La determinación de la actividad SOD se realizó siguiendo el método descrito por Crouch et al., 1981. La determinación de la actividad CAT se realizó siguiendo el método descrito por Aebi (1984). Con el objetivo de normalizar los datos obtenidos en los diferentes ensayos bioquímicos se realizó la cuantificación de proteínas totales por el método propuesto por Bradford (Bradford, 1976). Se encontró que la actividad enzimática SOD es atenuada por MET y DMSO 15% comparadas con el grupo control (embriones 8 hours), aunque se mostró diferencias significativas, con respecto al tratamiento 1 hora post-congelación + DMSO al 15%, produciendo una mayor producción de ERO, lo que conlleva un incremento en el daño a macromoléculas como lípidos, proteínas y ácidos nucleicos, alterando diversos procesos celulares. Por otro lado, la actividad enzimática CAT no presentó diferencias significativas entre tratamientos. En conclusión, el MET 15% fue el crioprotector que género menor estrés oxidativo comprobando que en embriones de yamú puede ser usado cómo crioprotector eficiente en protocolos de conservación. con respecto al tratamiento 1 hora post-congelación + DMSO al 15%, produciendo una mayor producción de ERO, lo que conlleva un incremento en el daño a macromoléculas como lípidos, proteínas y ácidos nucleicos, alterando diversos procesos celulares. Por otro lado, la actividad enzimática CAT no presentó diferencias significativas entre tratamientos. En conclusión, el MET 15% fue el crioprotector que género menor estrés oxidativo comprobando que en embriones de yamú puede ser usado cómo crioprotector eficiente en protocolos de conservación. con respecto al tratamiento 1 hora post-congelación + DMSO al 15%, produciendo una mayor producción de ERO, lo que conlleva un incremento en el daño a macromoléculas como lípidos, proteínas y ácidos nucleicos, alterando diversos procesos celulares. Por otro lado, la actividad enzimática CAT no presentó diferencias significativas entre tratamientos. En conclusión, el MET 15% fue el crioprotector que género menor estrés oxidativo comprobando que en embriones de yamú puede ser usado cómo crioprotector eficiente en protocolos de conservación. la actividad enzimática CAT no presentó diferencias significativas entre tratamientos. En conclusión, el MET 15% fue el crioprotector que género menor estrés oxidativo comprobando que en embriones de yamú puede ser usado cómo crioprotector eficiente en protocolos de conservación. la actividad enzimática CAT no presentó diferencias significativas entre tratamientos. En conclusión, el MET 15% fue el crioprotector que género menor estrés oxidativo comprobando que en embriones de yamú puede ser usado cómo crioprotector eficiente en protocolos de conservación.
Resumen en lengua extranjera 1
The principal aim of this study was the fact of determining the enzyme activities superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT), which indicate the oxidative stress in embryos yamú (Brycon amazonicus) when these are exposed into two different cryoprotectants methanol and dimethyl sulfoxide and kept at 15% -14°C during one hour. Finding this fact out, viable state segmentation (8 hpf) embryos were exposed into two cryoprotectants, methanol (MET) and dimethyl sulfoxide (DMSO) at 15% which were deposited in tubes type Falcon plastic sterile 13 mL relative 1:1 with cryoprotectant and stored solutions at -14°C during 1 hour. In each experiment a control group (embryos not subject to cryoprotectant) were included and sampled at the same time of the treatments. Additional to the treatments samples oocytes and newly fertilized eggs were taken. Samples of embryos were homogenized in a buffer solution coolant (100 mM Tris- HCl, 0.1 mM EDTA and 0.1% triton X-100) (v/v), pH 7.8, in a ratio of 1:4 (w/v) the homogenate was centrifuged and the supernatant was collected and stored at - 70°C until its specific analysis. Determining the SOD activity was performed according to the method described by Crouch et al., 1981. The determination of CAT activity was conducted following the method described by Aebi (1984). In order to normalize the data obtained in the various biochemical assays quantifying total proteins was performed by the method proposed by Bradford (Bradford, 1976) method. It was found that the enzyme activity SOD is attenuated by MET and DMSO 15% this results compared to the control group (Embryo 8 hours), although significant differences were found, according to treatment 1 hour after freezing + DMSO 15%, producing a higher ROS production, which leads to an increasing in damage to macromolecules such as lipids, proteins and nucleic acids and at the same time, it alters various cellular processes. Furthermore, CAT enzyme activity was not significantly different between treatments. In conclusion, the MET was 15% lower cryoprotectant gender verifying that oxidative stress in embryos can be used yamú crioprotectant or efficiently in conservation protocols.
Palabras clave
Desarrollo embrionario, Enzimas antioxidantes, Estrés oxidativo, Crioprotector
Tipo de documento
Trabajo de grado - Pregrado
Licencia Creative Commons
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Fecha de elaboración
2014
Programa académico
Zootecnia
Facultad
Facultad de Ciencias Agropecuarias
Citación recomendada
Valderrama Díaz, J. A. (2014). Determinación de la actividad catalasa CAT y superóxido dismutasa SOD en embriones de yamú Brycon amazonicus conservados A -14 °C. Retrieved from https://ciencia.lasalle.edu.co/zootecnia/260
Publisher
Universidad de La Salle. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Zootecnia