Files

Download

Download Full Text (3.3 MB)

Tutor 1

Bello García, Felio Jesús

Tutor 2

Torres García, Orlando

Resumen

La importancia de los cultivos celulares derivados de insectos radica en las aplicaciones que tienen a nivel de medicina humana y veterinaria, agricultura y biotecnología. Especialmente, estos cultivos celulares se han venido usando como sustratos para aislamiento e identificación de virus, para la producción de proteínas recombinantes, pesticidas virales, vacunas e insecticidas, como también en investigaciones básicas sobre genética, biología molecular, bioquímica, parasitología y endocrinología. A pesar de que en la actualidad existe un número significativo de líneas celulares que han sido establecidas de diversas especies de insectos, su aplicabilidad no alcanza a cubrir toda la demanda que exigen los diversos problemas de investigación y/o los procesos biotecnológicos relacionados con los campos de estudio donde estas células se podrían requerir. En la actualidad no existe una línea celular derivada de esta especie, razón por la cual se obtuvieron cultivos primarios, subcultivos y una línea celular derivada de Calliphora vicina (Diptera: Calliphoridae), esta mosca es de importancia sanitaria, ya que se alimenta de materia orgánica en descomposición, ocasionalmente genera miasis y puede ser un vector mecánico de virus, bacterias y parásitos; también, desde el punto de vista forense, su importancia radica en ser una de las primeras especies en colonizar cadáveres y, por lo tanto, las formas inmaduras son utilizadas como herramienta en la determinación del intervalo postmortem. También, puede ser utilizada en terapia larval. El objetivo general de este trabajo fue establecer una línea celular derivada de tejidos embrionarios de C. vicina. Estos cultivos celulares fueron caracterizados morfológica, citogenética y molecularmente. La fuente de tejidos embrionarios para efectuar los explantes fueron huevos embrionados de C. vicina. Los tejidos embrionarios se sembraron en cuatro medios de cultivo diferentes L15, Grace, Grace/L15 y DMEM, con pH entre 6.8 y 7.2 y fueron incubados a 28ºC, sin atmósfera de CO2. Sólo el medio Grace/L15 proporcionó las mejores condiciones para la adaptación, adhesión y proliferación celular. La monocapa confluente se obtuvo a los 8 días después de realizados los explantes. Inicialmente, la morfología predominante de las células fue heterogénea, luego en los subcultivos las formas celulares fueron fibroblastoides similares a nerviosas y en menor proporción epitelioides. El cariotipo de los cultivos celulares presentó una configuración diploide (2n=12), siendo el cromosoma X el de mayor longitud. Los pares de cromosomas autosómicos 1, 2, 4 y 5 fueron metacéntricos, el par 3 fue submetacéntrico y el par sexual metacéntrico. Se obtuvieron los patrones característicos de ADN con la técnica de PCR-RAPD a partir de la línea celular de C. vicina. Los resultados de los marcadores A2, A10 y A20 fueron utilizados para analizar el índice de similaridad entre los cultivos celulares y la fase de adulto de C. vicina, la cual estuvo en el rango de 0,88 a 0,96. Así mismo, la línea celular de C. vicina comparada con la línea celular LULO registró un rango entre 0,37 a 0,66. Los cultivos celulares de tejido embrionario de C. vicina podrían, potencialmente, ser a mediano plazo una alternativa para el aislamiento de péptidos antimicrobianos y moléculas involucradas en la regeneración y recuperación de tejidos, utilizados para el tratamiento de heridas de la piel o úlceras crónicas asociadas con leishmaniosis; así mismo, en úlceras de pie diabético. De igual manera,, podrán ser utilizados en las múltiples aplicaciones que, en general, presentan las líneas celulares derivadas de insectos

Resumen en lengua extranjera 1

The importance of cell cultures derived from insects lies in the applications they have at the level of human and veterinary medicine, as well as in agriculture and biotechnology. Especially, these cell cultures have been used as substrates for virus isolation and identification, for the production of recombinant proteins, viral pesticides, vaccines and insecticides, as well as in basic research on genetics, molecular biology, biochemistry, parasitology and endocrinology. Despite the fact that currently there is a significant amount of cell lines that have been established for various species of insects, their applicability does not cover the demanded amount by the various research problems and / or biotechnological processes related to the fields where these cells might be required. Currently, there is no cell line derived from this species, which is why primary cultures, subcultures and a cell line derived from Calliphora vicina (Diptera: Calliphoridae) were obtained, this fly is of sanitary importance, since it feeds on material decomposing organic, occasionally generates myiasis and can be a mechanical vector of viruses, bacteria and parasites; Also, from the forensic point of view, its importance lies in being one of the first species to colonize carcasses and, therefore, immature forms are used as a tool in determining the postmortem interval. Also, it can be used in larval therapy. The general objective of this work was to establish a cell line derived from C. vicina embryonic tissues. These cell cultures were characterized morphologically, cytogenetically, and molecularly. The source of embryonic tissues to carry out the explants were C. vicina embryonated eggs. The embryonic tissues were seeded in four different culture media L15, Grace, Grace / L15 and DMEM, with a pH between 6.8 and 7.2 and were incubated at 28ºC, without CO2 atmosphere. Only Grace / L15 medium provided the best conditions for cell adaptation, adhesion, and proliferation. The confluent monolayer was obtained 8 days after the explants were performed. Initially, the predominant cell morphology was heterogeneous, then in the subcultures the cell forms were nerve-like fibroblastoids and to a lesser extent epithelioid. The karyotype of the cell cultures presented a diploid configuration (2n = 12), with the X chromosome being the longest. Autosomal chromosome pairs 1, 2, 4, and 5 were metacentric, pair 3 was submetacentric, and the sexual pair metacentric. The characteristic DNA patterns were obtained with the PCR-RAPD technique from the C. vicina cell line. The results of markers A2, A10 and A20 were used to analyze the similarity index between cell cultures and the adult phase of C. vicina, which was in the range of 0.88 to 0.96. Likewise, the C. vicina cell line compared to the LULO cell line registered a range between 0.37 to 0.66. Embryonic tissue cell cultures of C. vicina could potentially be a medium-term alternative for the isolation of antimicrobial peptides and molecules involved in tissue regeneration and recovery, used for the treatment of skin wounds or associated chronic ulcers. with leishmaniasis; likewise, in diabetic foot ulcers. Similarly, they can be used in multiple applications that, in general, present the cell lines derived from insects

Programa académico

Maestría en Ciencias Veterinarias

Palabras clave

Calliphora vicina, Cultivos celulares, Morfología celular, Cariotipos, RAPD-PCR, Calliphora vicina, Cell cultures, Cell morphology, Karyotypes, RAPD-PCR

Tipo de documento

Tesis de maestría

Licencia Creative Commons

Creative Commons Attribution-Noncommercial-No Derivative Works 4.0 License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-Noncommercial-No Derivative Works 4.0 License.

Fecha de elaboración

2020

Programa académico

Maestría en Ciencias Veterinarias

Facultad

Facultad de Ciencias Agropecuarias

Publisher

Universidad de La Salle. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Maestría en Ciencias Veterinarias

Compartir

COinS