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Title

Infective process evaluation by Leishmania (L) Chagasi in the lull cell line, focusing on physicochemical and environmental variables

Fecha de recepción

16 de marzo de 2005

Fecha de aceptación

1 de septiembre de 2005

Resumen

El presente estudio describe la evaluación de la infección in vitro de Leishmania chagasi en una línea celular Lulo, derivada de tejidos embrionarios de Lutzomyia longipalpis, teniendo en cuenta variables ambientales y fisicoquímicas. El medio Grace/L-15, suplementado con 5% de Suero Fetal Bovino (SFB), fue utilizado para el mantenimiento de la línea celular Lulo. La cepa CL044B/84 de Leishmania chagasi se empleó en la infección de las células. Las variables fisicoquímicas del medio de cultivo tenidas en cuenta para los ensayos experimentales de la infección celular fueron: concentración de SFB (5%, 10%, 15% y 20%), ausencia y presencia de hemolinfa, pH (5. 5.5, 6. 6.5 y 6.8) y osmolalidad (350 mOsm/kg, 400 mOsm/kg y 450 mOsm/kg); también se evalúo la temperatura a la cual fueron incubadas las células infectadas (28°C, 32°C y 37°C). Cajasde cultivos estériles de 24 pozos, conteniendo laminillas de 12 mm de diámetro al interior de cada uno de ellos, se usaron como sustrato de las células infectadas; éstas se retiraron a los 3, 6 y 9 días postinfección. El mayor porcentaje de infección (33,3%) se alcanzó al 5% de SFB, a pH de 6,8, osmolalidad de 320 mOsm/Kg y a una temperatura de incubación de 26°C, sin atmósfera de C02. La selección de estas óptimas condiciones fisicoquímicas y ambientales en el proceso infectivo del parásito al interactuar con las células Lulo, permitió alcanzar niveles relativamente altos de infección, los cuales serán útiles en estudios básicos y aplicados, en la perspectiva de contribuir al control de la leishmaniasis.

Palabras clave

Leishmania chagasi, Lutzomyia longipalpis, variables fisicoquímicas, porcentajes de infección, condiciones ambientales

Abstract

The following research describes the evaluation in the in vitro infection by Leishmania (L.) chagasi in a Lulo cell line, resulting from Lutzomyia longipalpis embryonic tissue, taking into account physicochemical and environmental variables. The medium Gracel/L-15, containing 5% Fetal Bovine Serum (FBS), was used to maintain the cell strain Lulo. The infection process was performed by using Leishmania chagasi CLO44B/84 strain. The physicochemical variables of the growing medium evaluated for the experimental tests of the cell infection were: concentration of FBS (5%, 10%, 15%, and 20%), presence and absence of hemolinfa, pH (5. 5.5, 6. 6.5, and 6.8) and osmolality (35 400 y 450 mOsm/kg). In addition, the temperature which the infected cells were incubated (26°C, 32°C and 37°C) was also evaluated. As substrate for the infected cells, glass cover-slips of 12 mm of diameter in 24 well plates were used. The cover-slips with attached infected cells were removed after 3, 6, and 9 days post-infection. The Experimental observations showed that the greatest percentage of infection (33.3%), was obtained at the 5% FBS level, osmolality of 320 mOsm/Kg, a pH of 6.8 and an optimum temperature of 26°C. By selecting these parameters, high levels of infection were reached and these results will certainly be of great use in future studies and applications of the interaction vector-parasite-cells, in the perspective to contribute with leishmaniasis control.

Keywords

Leishmania chagasi, Lutzomyia longipalpis, physicochemical variables, infection percentage, enviromental variables

Tipo de documento

Article

Licencia Creative Commons

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Páginas

23 - 38

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